Нижче наведено п’ять основних систем рідинного хроматографа:
1. Система впорскування
Як правило, для завершення операції впорскування використовується діафрагмовий пробовідбірник або кімната для впорскування під високим тиском, а об’єм впорскування є постійним.
Це корисно для покращення відтворюваності аналітичних зразків.
2. Інфузійна система
Система складається з трьох частин: насоса високого тиску, резервуара рухомої фази та градієнта. Загальний тиск насоса високого тиску становить 1,47~4,4X107Па, а швидкість потоку регулюється та стабільна. Коли рухома фаза високого тиску проходить через хроматографічну колонку, вона може зменшити ефект дифузії зразка в колонці та прискорити швидкість його руху в колонці. Це корисно для покращення роздільної здатності, відновлення зразка та підтримки біологічної активності зразка. Помилки зберігання рухомої фази та градієнти можуть змінити рухому фазу відповідно до властивостей стаціонарної фази та зразка, включаючи зміну полярності елюенту, іонної сили, значення рН або переключення на інші методи
3. Сепараційна система
Система включає хроматографічні колонки, сполучні трубки та термостати.
Довжина хроматографічної колонки зазвичай становить 10-50 см (якщо потрібні дві разом, між ними можна додати сполучну трубку), внутрішній діаметр — 2-5 мм. Виготовляється з високоякісної нержавіючої сталі, товстостінної скляної трубки, титанового сплаву та інших матеріалів. Колонка оснащена діаметром 5-10 μ Фіксована фаза з розміром частинок m (складається з матриці та фіксованої рідини), у якій матриця складається зі смоли високої механічної міцності або силікагелю, обидва з яких мають характеристики інертності (такі як основне видалення силікатних генів на поверхні силікагелю), пористості та великої питомої площі поверхні. Крім того, його поверхню механічно покрито (подібно до підготовки нерухомих фаз у газовій хроматографії) або хімічно з'єднані з різними генами (такими як фосфатні, четвертинні амінні, гідроксиметильні, фенільні, аміно- або алкільні групи різної довжини вуглецевих ланцюгів) або лігандами.
Таким чином, ці типи речовин з різними фіксованими відносними структурами мають хорошу вибірковість. Наприклад, шляхом з’єднання лектину гороху (PSA) на поверхні пористого силікагелю глікопротеїн можна виділити з фібробластів. Крім того, плазміда стаціонарної фази невелика, і шар колонки легко досягти однорідного та щільного стану, що може значно зменшити ефект дифузії вихрових струмів. Матриця має малий розмір частинок і неглибокі мікропори, а зразок має короткий масообмін у мікропористій області. Це корисно для зменшення пропускної здатності та покращення роздільної здатності. Згідно з аналізом теорії ефективності колонки, чим менший розмір частинок матриці, тим більше теоретичне число N лотка.
4. Система виявлення
Для рідинної хроматографії зазвичай використовуються три детектори: УФ-детектор, детектор диференціального показника заломлення та флуоресцентний детектор.
УФ-детектор
Цей детектор підходить для виявлення зразків із характеристиками поглинання ультрафіолетового (або видимого) світла.
Його характеристики: широкий спектр застосувань (наприклад, можна використовувати білки, нуклеїнові кислоти, амінокислоти, нуклеотиди, пептиди, гормони тощо); Висока чутливість (межа виявлення 10-10 г/мл); Широкий лінійний діапазон; Не чутливий до зміни температури і швидкості потоку; Може виявляти зразки, елюйовані градієнтним розчином.
5. Система обробки даних
Ця система може збирати, зберігати, відображати, друкувати та обробляти тестові дані, забезпечуючи належне розділення, підготовку та ідентифікацію зразків.
Таким чином, рідинний хроматограф складається з системи зразків, системи інфузії, системи розділення, системи виявлення та системи обробки даних. Поєднання цих систем робить експеримент більш надійним і стабільним.